果樹苗木無毒苗的培育 |
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| 來源：未知 作者：admin 發布時間：2013-07-29 09:34 |
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果樹苗木無毒苗的培育 果樹苗木病毒病多由嫁接傳染，一旦病毒侵入樹體后，在自 然條件下永遠保存在樹體中，無法消除。根據果樹苗木病毒病及 其類病毒病害的侵染、傳播和發病特點，國內外總的防治策 略是使用無病毒或抗病毒繁殖材料，嚴格植物檢疫，清除和 限制侵染源，防治和控制傳毒蟲媒。果樹苗木嫁接繁殖時，如果 母本樹帶有病毒，就必然把病毒傳染給新繁殖的苗木。目 前，在栽培的果樹苗木中，有些品種已全部受病毒侵染，患有病 毒病。為了避免病毒病的危害，就必須清除病樹中的病毒， 使之無病毒化，這是果樹苗木病毒病防治對策的第一步。 苗木網,www.cqhuayin.com 獲得無病毒母本樹的方法主要有3種。第一種方法是從 果園中選擇品種純正、多年間樹勢健壯、品質產量都好的單 株，經病毒檢驗，確認無病毒后即可獲得母本樹；第二種方 法是人工培育無病毒母本樹，包括通常采用熱處理與莖尖培 養相結合和莖尖生長點培養2種方法；第三種方法是引進國 外無病毒品種。 果樹苗木熱處理脫毒，是生產上應用最早、最廣泛的一種脫 毒手段。在果樹苗木生產上，這種技術已經很成熟，已培育出許 多無病毒果樹苗木單株。而莖尖組織培養需要精細的技術，與熱 處理相比，難度大得多。但是對于用熱處理不能或難于清除 的病毒，用莖尖培養或熱處理同組織培養相結合的方法，則 可以獲得無病毒的個體。此外，最近開發出的微體嫁接技 術，已應用于獲得無病毒個體并引起了人們的廣泛關注，其 一、熱處理脫毒 999苗木網,www.cqhuayin.com 早在100多年前，蘇格蘭的園藝工作者就開始利用熱力 治療植物病害。1923年，采用溫湯處理而脫去甘蔗的一種 病毒，成為了在病毒病害中最早脫毒成功的例子。在果樹苗木方 面，于1936〜1941年間，對桃叢生病、桃黃化病、偽桃病 等，先后用熱處理，主要是溫湯浸漬法獲得脫毒成功。其中 對桃叢生病毒，不僅用溫湯而且用高溫空氣處理也獲得成 功。同時設計出一種處理裝置，探索出了熱空氣處理法。即 把空氣溫度調節在30~40^0之間，處理一定時間，以達到 脫毒的目的。自1950年對馬鈴薯卷葉病毒用熱處理脫毒取 得成功以來，到目前為止，除黃化型病毒以外，其他多種病 毒的脫毒也相繼取得成功。常綠果樹苗木病毒病用熱處理法脫毒 并取得成功的實例主要有柑橘速衰病毒、柑橘裂皮類病毒、 柑橘脈突病毒、柑橘碎葉病毒等。 熱處理方法有2種，一是溫湯浸漬和高溫蒸汽處理，另 一是高溫空氣處理。 (一）溫湯浸潰和高溫蒸汽處理 999苗木網,www.cqhuayin.com 通常應用的有50〜551處理10~501!^、5^：處理1〜5}1 或35cC處理30〜40h等多種溫時組合。特別是熱不穩定的 病毒類，有些病例在40〜45^：處理5〜301丨11或30^：處理34 即可脫毒。即樹體的一部分。由于溫湯處理對植物體的損害 較大，有時會導致植物組織窒息或是呈水漬狀，所以在對果 樹進行熱處理時，通常只處理接穗；而高溫蒸汽處理，則對 -42 - 植物組織損害較少，因此，現在多用高溫蒸汽處理。在進行 熱處理時，最重要的是要嚴格控制溫度和處理時間。 (二）高溫空氣處理 999苗木網,www.cqhuayin.com 處理的植物體，通常多用盆栽被病毒侵染的整株苗木， 因為熱處理所用的病株，其染病組織越小脫毒效果越高。但 剛移栽的苗木根系耐熱性差，一般用移栽后3個月，最好用 盆栽1年左右的苗木進行處理。泥制花盆具有良好的耐熱 性，熱處理中根部溫度將比熱處理溫度下降數度，因此推薦 用泥制花盆。所以柑橘、蘋果的熱處理，用無病毒的實生砧 芽接帶毒的病穗，芽接1周后開始進行熱處理，脫毒效果良 好。目前，熱處理裝置有多種，小的只有11^，大的人可以 進入內部操作，可供大量試材熱處理用。為調節濕度，還應 安裝加濕器。盡管高溫空氣處理不像溫湯處理那樣，要求病 毒鈍化溫度與植物體能忍受溫度之間相吻合，但溫度及有關 條件也必須力求精密。 999苗木網,999miaomu.com 熱處理溫度因病毒種類而異。有的病毒在33〜34尤條 件下即可脫毒，另一些病毒必須在39〜42的條件下，才 能脫毒。生產實踐中，一般多用35〜381恒溫，尤以381 恒溫的實例較多。如蘋果在37尤土1尤恒溫下熱處理28〜 30d,對褪綠葉斑病毒、莖痘病毒和莖溝病毒的平均脫毒率 為 26. 5%。 苗木網,www.cqhuayin.com 許多病例證明，變溫熱處理較恒溫熱處理的脫毒效果 好。近年來，為了減少高溫對植物體的損傷，有些病例改為 白天用40〜45^：處理12〜16h,夜間30〜35^：處理8 ~ 12ho 生產實踐中以白天如^處理^匕，夜間30(^處理8匕的實例 居多。但也不能一概而論。如柑橘速衰病毒幼苗黃化株系， 在381恒溫條件下處理8周不能脫毒，必須處理12周才能 脫毒；反之，在白天40，夜間30(^的變溫條件下，處理 8周即能脫毒。柑橘碎葉病毒，38^處理16周不能脫毒， 但白天401、夜間301處理6周和白天441、夜間301處 理2周卻脫毒成功。 在進行熱處理脫毒時，還應控制好相對濕度和光照。通 常相對濕度應保持在70^〜80*之間。在過分干燥的條件 下，熱處理的新梢生長不良。光以自然光最好，但秋冬期 間，適當補充人工光照，對新梢伸長有良好作用。而有的病 例用熒光燈和白色燈照明161即可脫毒。 中國苗木網,999miaomu.com 為了提高植物的耐熱性，延長植物在熱處理中的生存時 間，熱處理前往往要進行預處理。例如，在用38^：熱處理 前，先在27〜351下處理1〜2周。在植物耐熱性允許的范 圍內，熱處理的溫度越高脫毒效果越好，因此，前處理的溫 度也以逐漸由低到高為好。 植物體的耐熱性與植物體各部分組織中的碳水化合物的 含量成正相關，因此，應在植物組織成熟的季節進行 熱處理。 用熱處理脫毒法培育無病毒個體時，通常是剪取苗木在 熱處理中伸長出的新梢頂端嫩枝，將其嫁接到無病毒實生砧 木上。若是用新梢停止生長的苗進行熱處理時，可剪取已硬 化的枝條，直接嫁接到砧木上。對于葡萄，剪取熱處理中伸 長新梢或副梢的頂端部分，長約1〜5。1，扦插在珍珠巖等 適宜的保濕扦插床中，不久即發根，一個月后即可移植。如 果用此法不能獲得無病毒個體時，就必須剪取新梢頂端更短 二、莖尖培養脫毒 (―)概述 中國苗木網,www.cqhuayin.com 病毒侵入植物體后，一般具有系統侵染性，也即具有全 身擴展的特性，但不同的組織和部位，病毒的分布和濃度有 很大差異，甚至有的組織或部位尚無病毒。植物感染病毒后 不含有病毒的部位，對病毒的防治具有重要的意義。例如， 大多數植物的種子不帶病毒，因此可以自然獲得無病毒后 代。除種子之外生長點附近，即莖尖和根尖的分生組織也多 不含有病毒。但不含有病毒的部分是極小的，不超過0. 1〜 0.5mn^這樣小的無病毒組織，以往無法繁殖利用。自組織 培養技術發展以來，可以切取這種微小的無病毒組織，用組 織培養技術也可培養成完整的植株。如1934年White用感 染煙草花葉病毒的番茄根和1949年Limasset等用感染煙草 花葉病毒的煙草莖分別進行的研究結果表明，病毒濃度呈梯 度變化，病毒粒子隨著植物組織的成熟而增加，頂端組織不 帶病毒。Morel等于1952年從感染花葉病毒和斑萎病毒的植 株上，切取莖尖組織進行培養，成功地獲得無病毒的大麗 花。目前，莖尖培養在草本植物上應用較多，而在木本植物 上應用甚少。這項技術在番木瓜、草莓、柑橘和葡萄的脫毒 方面，已獲成功并取得初步應用效果。 莖尖培養脫毒程序，一般有以下6個步驟：第一步，材 料處理和接種；第二步，誘導芽分化和小植株的增殖；第三 步，誘導生根；第四步，生根植株的移栽；第五步，移入苗 :第六步，病毒檢測。其中分化、增殖、生根3個步驟， 均需要特殊的培養基。在果樹苗木莖尖培養中最常使用的是河- 中國苗木網,www.cqhuayin.com 培養基，但各步驟中所需要的植物生長調節劑種類、用量及 配合比例各不相同，并依培養的果樹苗木種類而異。脫毒成功機 率與莖尖大小直接相關。對不同的植物，采用大小相同的莖 尖進行培養，脫毒效果主要取決于病毒類型而不是植物種 類。正常莖尖培養時切取的莖尖越小，脫毒率就越高。草莓 切取莖尖為0.2〜0.311^時，脫毒率為100*;切取莖尖為 1.011^時，脫毒率僅為50*。但莖尖過小培養成活率低， 而且操作難度也大。因此，脫毒時要兼顧脫毒率和成活率， 莖尖切取的大小要適中，一般切取長度為0.2~0.50^，帶 有1〜2個葉原基的莖尖作為培養材料。蘋果切取0. 1〜 苗木網,www.cqhuayin.com 0.211^莖尖培養，脫毒株率為35.0^。其中，蘋果褪綠葉 斑病毒的脫毒株率為80.0^，蘋果莖痘病毒的為65.0^, 蘋果莖溝病毒的為50.0^。在未脫除的病毒中，蘋果褪綠 葉斑病毒占19.19^，蘋果莖痘病毒占33.3*，蘋果莖溝病 毒占47. 6%。 (二）莖尖培養脫毒機制 999中國苗木網,www.cqhuayin.com 應用電子顯微鏡和熒光抗體技術可以明顯地看出，在每 一個“植物-病毒”組合中，都存在一*個特殊的頂端免疫 區。這個頂端免疫區決定了無毒莖尖的大小^如果僅最頂端 一個細胞不帶病毒，則無毒簽尖大小為0.1〜0.3^^;如果 免疫區比較大，則無毒蓮尖大小為0.5〜3111^然而，即使 在分生組織細胞中有病毒粒子，培育無病毒苗也是可能的。 對此已提出多種解釋，如：正常的或病毒的核蛋白合成之間 的營養競爭、酚胺抑制劑的存在和因切取莖尖時細胞受傷而 引起的代謝破壞。雖然這些假設中沒有一種令人十分信服的 解釋，然而，這些假設卻很好地說明了較小的莖尖對于脫毒 (三）應用 中國苗木網,www.cqhuayin.com 莖尖培養獲得的小幼株，可離體培養得到分生單系。要 盡可能快地對每一個分生單系的2株或3株小幼株進行鑒 定，確定是否還帶病毒。在確定分生單系是否不帶病毒之 前，需多次重復這些實驗。在有條件的單位，可用酶聯免疫 吸附檢測法代替指示植物進行這種鑒定。由此而獲得的無病 毒分生單系，通過腋生分枝快速繁殖，可在短期內給生產單 位提供無病毒試管苗。 通常情況下，無病毒苗是保存在黑暗、低溫的條件下， 在此條件下，無病毒苗可在試管中保存很長時間。如木本果 樹的試驗結果是，切除在繁殖培養基上伸長生長莖的所有葉 片，再把莖浸漬在基本培養基中，然后把試管放在冰箱中， 結果5年后，這些枝條在新鮮培養基上仍能增殖。 苗木網,999miaomu.com 推薦閱讀： |
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