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夜香樹的組織培養

來源：未知作者：admin 發布時間：2013-07-28 07:00

夜香樹又名洋素馨、夜來香、夜丁香，屬于茄科夜香樹屬。常綠灌木．高l一3m。枝條細長而稍彎垂。葉互生，長圓狀披針形或狹長圓形，長6～16cm，紙質，全緣，頂端漸尖．基部近圓形。花數多．排成疏散分枝的聚傘花序腋生或頂生；花冠高腳碟狀，長約2cm．綠色或黃綠色，檐部5淺裂，夜間極香，故名夜香樹。漿果橢圓形，直徑5～7mm。熟時白色；具種子l~6粒(多數為2~3粒)，長卵形或一側壓扁，直徑1~2mm，黑褐色。干粒重6．45g。夜香樹原產南美洲。我國福建和云南有栽培。性喜溫暖氣候。畏寒，喜光．在半陰處亦能適應；較粗生，在沙土上也能生長，但以疏松濕潤的沙土壤或壤土生長良好。萌芽力強。花期7一11月．入夜散發濃郁香氣；果期冬春季，種子2—3月成熟。夜來香樹條細長，夏秋開花．黃綠色花朵傍晚開放．飄出陣陣撲鼻濃香．在南方多用來布置庭院、窗前、塘邊和亭畔。鑒于目前夜香樹的扦插繁殖耗費大量的原始材料和時間．不適于大規模化生產。組織培養技術的發展為植物的生長繁殖開辟了一條新的途徑。培養路線：培養壯苗生根；放風鍛煉幼苗；出瓶移栽。直接采用小拱棚大田一步移栽的方式．可獲得性狀優良的大量種苗。
l材料和方法
1．1 材料

原始材料為植物光照實驗室盆栽夜香樹．選取生長發育良好的母株休眠芽枝段．剪成5~6cm莖段作為組織培養研究的外植體。 999中國苗木網,www.cqhuayin.com
1.2 實驗方法
基本培養基：實驗采用MS培養基．其中附加不同細胞分裂素(6一BA)和生長素(NAA、IBA)。所有培養基中激素單位為mg／L，pH值5．8—6．0，瓊脂0．6％。

外植體處理：將外植體用自來水沖洗30min．然后在超凈工作臺上剪成1．5～2．0cm的帶芽莖段．采用2次滅菌法．即先用70％的酒精滅菌34s．再用0．1％升汞溶液消毒8min．然后用無菌水沖洗5次，接種于誘導培養基上。

培養條件：培養室溫度為22+20C。以日光燈為主光源。光照時間14h／d。光照強度為2500—3000lx。

最佳誘導和生根培養基的篩選：通過添加不同的生長調節物質(6一BA、NAA和IBA)．叢生芽誘導處理見表l，芽分化誘導處理見表2。生根培養：從繼代培養材料中選取3.0~5.Ocm的有效芽苗．切成1.0~1.5cm的莖段。轉入l/2MS+1.5％蔗糖+0．6％瓊脂為基本培養基．在附加不同濃度IBA情況下進行生根實驗(表3)。一定要去除基部的葉子，因為基部的葉子一經接觸培養基就會逐漸變硬、拱起和蜷縮，且極易發根。從而影響正常生根和生長。比較其各階段芽萌發、增殖系數、生根率等數據。篩選出最佳組合。
2結果與分析
2.1叢生芽誘導

這一階段主要是誘導芽，在外植體初代培養8-10d．部分外植體芽開始膨大。14d后相繼出現新芽；培養24d后新芽可長至2．0~3．8cm，生長情況見表l。

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從表l可以看出。Ⅱ、Ⅳ這三個處理均有較高的出芽率．其中以處理Ⅱ即MS+6一BA0．5+NAA0．1芽萌發情況最好．芽粗壯．葉大且舒展．平均伸長3．5cm；處理I不添加生長調節物質，長勢較整齊，但芽的萌發較慢，新芽葉片小且蜷縮．平均伸長1．5cm;處理Ⅲ芽萌發情況不好，玻璃化情況嚴重。處理Ⅳ芽萌發情況亦可，平均伸長2．7cm，但葉片小，不舒展，長勢較弱。因此，Ⅳ雖有較高的出芽率，但新芽長勢不好。不適宜作為繼代材料使用。處理Ⅱ既有較高的出芽率且新芽長勢又好，是較適宜的初代培養基。

2．2芽分化誘導培養

芽分化增殖過程是夜香樹離體快速繁殖培養過程中一個非常重要的環節。獲得無菌材料后，是否能順利進入快速增殖培養階段。篩選出符合要求分化增殖培養基是此階段的主要任務．對于離體快速繁殖最終是否能應用于生產時間．受兩個關鍵因素制約：( l ）芽的增殖率、芽的增殖速度是離體快速繁殖中的重要環節，直接關系到能否商業化生產；( 2 ）有效芽所占比例，指可作為繼代材料或生根材料的芽占全部芽的百分率。此時芽的質量決定了芽的利用率的高低，所以選擇一個增殖率高且有效芽多的增殖培養基是離體快速繁殖的關鍵。
將第一階段培養成功的芽切下，接種于分化增殖培養基上，培養基以MS 為基本培養基，6 一BA 、IBA 分別設了5 個梯度，共50 個處理，培養25d 。對生長情況（表2 ）分析可知，芽增殖用6 - BAO.5mg/L、IBAO.2mg/L時，芽增殖倍數為7.5，芽苗生長正常，節間略長，但有利于繼代繁殖。所以確定選取增殖倍數在5 一6 的分化增殖培養基，既符合增殖效果又符合得到健壯有效苗雙重標準的處理為6-BA0.4~0.5mg/L，IBAO.2 一0.3mg/L 。中國苗木網,www.cqhuayin.com
2.3 生根培養
由表3 分析可知，經過30d 的生根培養，不同濃度IBA 對夜香樹生根率、生根數均有不同程度的影響，其中以IBA O.3mg/L 時生根情況最好，生根率高，發根早。有4 一5 條側生根。當IBAO.5mg/L時發現，有些根生長在植株基部愈傷組織上，根粗壯，側根多，但從苗瓶中取出移栽時根容易脫落，成活率不高。實驗還表明，夜香樹生根快慢與生根質量不僅受培養基的影響，而且與生根材料的健壯程度與木質化程度有密切關系。粗壯、半木質化材料生根快，主根與側生根發育好（表3 ）。

2.4 煉苗與移栽
夜香樹試管苗在組培室內濕度比較恒定、無菌條件下產生出來的，因此，沒有經過抗冷、抗熱、抗早或抗病等因素的煉苗，當移栽、種植到小棚或溫室栽培后往往會受到各種不利因素的影響，所以，在種植后7d 應及時噴灑殺菌劑，每隔7 一10d 噴1 次。常用殺菌劑有多菌靈、瑞毒素、波爾多液，濃度掌握在l000~1500倍為宜。
生根培養28d 后，當瓶內組培苗長到scm 左右時，將生根的瓶苗移人自然光下光培養7d 后揭膜。為減少取苗時對根系的傷害，在拔苗前適當往瓶中加人一些自來水浸泡l 一2h ，將苗拔出后用自來水沖去附著的根部的瓊脂，移栽到用蒸汽消毒過的細煤渣或細沙中，成活率可達92 腸以上。在煉苗床上培養15~20d 移人大田或容器中。中國苗木網,www.cqhuayin.com
3 苗期管理
移植后每天淋水兩次，淋水時注意不要用膠管或噴槍直射、直淋，最好用噴霧方式淋水。因為試管苗幼小，直射、直淋都會造成植株歪斜。生長初期7d 噴施氮肥兩次，21d 后加少許磷、鉀肥，棍合施用�；ê髮⒖葜瓦^密枝條剪除．對徒長進行截短處理。常見病害有輪紋病，可用50 ％甲基托布津可濕性粉劑500 倍液噴灑。蟲害有介殼蟲和粉虱，用50 ％殺螟松乳油1000倍液噴殺。
4 結論
Ms + 6-BAo.5mg/L + NAA0.lmg/L ＋蔗糖3.0%＋瓊脂0.6 ％是夜香樹較為理想的誘導芽萌發的培養基；芽增殖培養基為MS+6-BA0.5mg/L，IBA0.2mg/L ＋蔗糖3 % ＋瓊脂0.6 % ，繼代培養25d 增殖系數可達7.5 ，且生長健壯。
在1/2MS + IBAO.3mg/L十蔗糖0.15％十瓊脂0.6 ％的培養基上，夜香樹生根效果較好，生根率達到100%，平均根數為5.7 。在夜香樹移栽煉苗的過程中要嚴格控制空氣相對濕度，實驗過程中發現夜香樹瓶苗極易失水皺縮，煉苗前10d 空氣相對濕度都應該保持在80 ％以上，最好是通過扣玻璃瓶或塑料薄膜來保持濕度。
夜香樹的花香過于濃郁，近距離聞其香氣易使人引起頭暈或不舒服的感覺。故只可在公園或庭院的空曠處種植，且數量不宜過多過密。

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5 討論
在試管苗生根培養中，耗費了大量的時間和培養空間，而采用試管苗瓶外生根不僅可以減少一次無菌操作的步驟，提高了培養空間，又簡化了組織培養程序，降低了生產成本，提高了繁殖系數，能進一步解決工廠化育苗的難題。因此是一項值得研究的技術之一。

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