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夜香樹(shù)的組織培養(yǎng)

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來(lái)源：未知作者：admin 發(fā)布時(shí)間：2013-07-28 07:00

夜香樹(shù)又名洋素馨、夜來(lái)香、夜丁香，屬于茄科夜香樹(shù)屬。常綠灌木．高l一3m。枝條細(xì)長(zhǎng)而稍彎垂。葉互生，長(zhǎng)圓狀披針形或狹長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)6～16cm，紙質(zhì)，全緣，頂端漸尖．基部近圓形。花數(shù)多．排成疏散分枝的聚傘花序腋生或頂生；花冠高腳碟狀，長(zhǎng)約2cm．綠色或黃綠色，檐部5淺裂，夜間極香，故名夜香樹(shù)。漿果橢圓形，直徑5～7mm。熟時(shí)白色；具種子l~6粒(多數(shù)為2~3粒)，長(zhǎng)卵形或一側(cè)壓扁，直徑1~2mm，黑褐色。干粒重6．45g。夜香樹(shù)原產(chǎn)南美洲。我國(guó)福建和云南有栽培。性喜溫暖氣候。畏寒，喜光．在半陰處亦能適應(yīng)；較粗生，在沙土上也能生長(zhǎng)，但以疏松濕潤(rùn)的沙土壤或壤土生長(zhǎng)良好。萌芽力強(qiáng)。花期7一11月．入夜散發(fā)濃郁香氣；果期冬春季，種子2—3月成熟。夜來(lái)香樹(shù)條細(xì)長(zhǎng)，夏秋開(kāi)花．黃綠色花朵傍晚開(kāi)放．飄出陣陣撲鼻濃香．在南方多用來(lái)布置庭院、窗前、塘邊和亭畔。鑒于目前夜香樹(shù)的扦插繁殖耗費(fèi)大量的原始材料和時(shí)間．不適于大規(guī)模化生產(chǎn)。組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展為植物的生長(zhǎng)繁殖開(kāi)辟了一條新的途徑。培養(yǎng)路線：培養(yǎng)壯苗生根；放風(fēng)鍛煉幼苗；出瓶移栽。直接采用小拱棚大田一步移栽的方式．可獲得性狀優(yōu)良的大量種苗。
l材料和方法
1．1 材料

原始材料為植物光照實(shí)驗(yàn)室盆栽夜香樹(shù)．選取生長(zhǎng)發(fā)育良好的母株休眠芽枝段．剪成5~6cm莖段作為組織培養(yǎng)研究的外植體。 999中國(guó)苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
基本培養(yǎng)基：實(shí)驗(yàn)采用MS培養(yǎng)基．其中附加不同細(xì)胞分裂素(6一BA)和生長(zhǎng)素(NAA、IBA)。所有培養(yǎng)基中激素單位為mg／L，pH值5．8—6．0，瓊脂0．6％。

外植體處理：將外植體用自來(lái)水沖洗30min．然后在超凈工作臺(tái)上剪成1．5～2．0cm的帶芽莖段．采用2次滅菌法．即先用70％的酒精滅菌34s．再用0．1％升汞溶液消毒8min．然后用無(wú)菌水沖洗5次，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)室溫度為22+20C。以日光燈為主光源。光照時(shí)間14h／d。光照強(qiáng)度為2500—3000lx。

最佳誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)基的篩選：通過(guò)添加不同的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)(6一BA、NAA和IBA)．叢生芽誘導(dǎo)處理見(jiàn)表l，芽分化誘導(dǎo)處理見(jiàn)表2。生根培養(yǎng)：從繼代培養(yǎng)材料中選取3.0~5.Ocm的有效芽苗．切成1.0~1.5cm的莖段。轉(zhuǎn)入l/2MS+1.5％蔗糖+0．6％瓊脂為基本培養(yǎng)基．在附加不同濃度IBA情況下進(jìn)行生根實(shí)驗(yàn)(表3)。一定要去除基部的葉子，因?yàn)榛康娜~子一經(jīng)接觸培養(yǎng)基就會(huì)逐漸變硬、拱起和蜷縮，且極易發(fā)根。從而影響正常生根和生長(zhǎng)。比較其各階段芽萌發(fā)、增殖系數(shù)、生根率等數(shù)據(jù)。篩選出最佳組合。
2結(jié)果與分析
2.1叢生芽誘導(dǎo)

這一階段主要是誘導(dǎo)芽，在外植體初代培養(yǎng)8-10d．部分外植體芽開(kāi)始膨大。14d后相繼出現(xiàn)新芽；培養(yǎng)24d后新芽可長(zhǎng)至2．0~3．8cm，生長(zhǎng)情況見(jiàn)表l。

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從表l可以看出。Ⅱ、Ⅳ這三個(gè)處理均有較高的出芽率．其中以處理Ⅱ即MS+6一BA0．5+NAA0．1芽萌發(fā)情況最好．芽粗壯．葉大且舒展．平均伸長(zhǎng)3．5cm；處理I不添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，長(zhǎng)勢(shì)較整齊，但芽的萌發(fā)較慢，新芽葉片小且蜷縮．平均伸長(zhǎng)1．5cm;處理Ⅲ芽萌發(fā)情況不好，玻璃化情況嚴(yán)重。處理Ⅳ芽萌發(fā)情況亦可，平均伸長(zhǎng)2．7cm，但葉片小，不舒展，長(zhǎng)勢(shì)較弱。因此，Ⅳ雖有較高的出芽率，但新芽長(zhǎng)勢(shì)不好。不適宜作為繼代材料使用。處理Ⅱ既有較高的出芽率且新芽長(zhǎng)勢(shì)又好，是較適宜的初代培養(yǎng)基。

2．2芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)

芽分化增殖過(guò)程是夜香樹(shù)離體快速繁殖培養(yǎng)過(guò)程中一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)。獲得無(wú)菌材料后，是否能順利進(jìn)入快速增殖培養(yǎng)階段。篩選出符合要求分化增殖培養(yǎng)基是此階段的主要任務(wù)．對(duì)于離體快速繁殖最終是否能應(yīng)用于生產(chǎn)時(shí)間．受兩個(gè)關(guān)鍵因素制約：( l ）芽的增殖率、芽的增殖速度是離體快速繁殖中的重要環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到能否商業(yè)化生產(chǎn)；( 2 ）有效芽所占比例，指可作為繼代材料或生根材料的芽占全部芽的百分率。此時(shí)芽的質(zhì)量決定了芽的利用率的高低，所以選擇一個(gè)增殖率高且有效芽多的增殖培養(yǎng)基是離體快速繁殖的關(guān)鍵。
將第一階段培養(yǎng)成功的芽切下，接種于分化增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基以MS 為基本培養(yǎng)基，6 一BA 、IBA 分別設(shè)了5 個(gè)梯度，共50 個(gè)處理，培養(yǎng)25d 。對(duì)生長(zhǎng)情況（表2 ）分析可知，芽增殖用6 - BAO.5mg/L、IBAO.2mg/L時(shí)，芽增殖倍數(shù)為7.5，芽苗生長(zhǎng)正常，節(jié)間略長(zhǎng)，但有利于繼代繁殖。所以確定選取增殖倍數(shù)在5 一6 的分化增殖培養(yǎng)基，既符合增殖效果又符合得到健壯有效苗雙重標(biāo)準(zhǔn)的處理為6-BA0.4~0.5mg/L，IBAO.2 一0.3mg/L 。中國(guó)苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
2.3 生根培養(yǎng)
由表3 分析可知，經(jīng)過(guò)30d 的生根培養(yǎng)，不同濃度IBA 對(duì)夜香樹(shù)生根率、生根數(shù)均有不同程度的影響，其中以IBA O.3mg/L 時(shí)生根情況最好，生根率高，發(fā)根早。有4 一5 條側(cè)生根。當(dāng)IBAO.5mg/L時(shí)發(fā)現(xiàn)，有些根生長(zhǎng)在植株基部愈傷組織上，根粗壯，側(cè)根多，但從苗瓶中取出移栽時(shí)根容易脫落，成活率不高。實(shí)驗(yàn)還表明，夜香樹(shù)生根快慢與生根質(zhì)量不僅受培養(yǎng)基的影響，而且與生根材料的健壯程度與木質(zhì)化程度有密切關(guān)系。粗壯、半木質(zhì)化材料生根快，主根與側(cè)生根發(fā)育好（表3 ）。

2.4 煉苗與移栽
夜香樹(shù)試管苗在組培室內(nèi)濕度比較恒定、無(wú)菌條件下產(chǎn)生出來(lái)的，因此，沒(méi)有經(jīng)過(guò)抗冷、抗熱、抗早或抗病等因素的煉苗，當(dāng)移栽、種植到小棚或溫室栽培后往往會(huì)受到各種不利因素的影響，所以，在種植后7d 應(yīng)及時(shí)噴灑殺菌劑，每隔7 一10d 噴1 次。常用殺菌劑有多菌靈、瑞毒素、波爾多液，濃度掌握在l000~1500倍為宜。
生根培養(yǎng)28d 后，當(dāng)瓶?jī)?nèi)組培苗長(zhǎng)到scm 左右時(shí)，將生根的瓶苗移人自然光下光培養(yǎng)7d 后揭膜。為減少取苗時(shí)對(duì)根系的傷害，在拔苗前適當(dāng)往瓶中加人一些自來(lái)水浸泡l 一2h ，將苗拔出后用自來(lái)水沖去附著的根部的瓊脂，移栽到用蒸汽消毒過(guò)的細(xì)煤渣或細(xì)沙中，成活率可達(dá)92 腸以上。在煉苗床上培養(yǎng)15~20d 移人大田或容器中。中國(guó)苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
3 苗期管理
移植后每天淋水兩次，淋水時(shí)注意不要用膠管或噴槍直射、直淋，最好用噴霧方式淋水。因?yàn)樵嚬苊缬仔。鄙洹⒅绷芏紩?huì)造成植株歪斜。生長(zhǎng)初期7d 噴施氮肥兩次，21d 后加少許磷、鉀肥，棍合施用。花后將枯枝和過(guò)密枝條剪除．對(duì)徒長(zhǎng)進(jìn)行截短處理。常見(jiàn)病害有輪紋病，可用50 ％甲基托布津可濕性粉劑500 倍液噴灑。蟲(chóng)害有介殼蟲(chóng)和粉虱，用50 ％殺螟松乳油1000倍液噴殺。
4 結(jié)論
Ms + 6-BAo.5mg/L + NAA0.lmg/L ＋蔗糖3.0%＋瓊脂0.6 ％是夜香樹(shù)較為理想的誘導(dǎo)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基；芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L，IBA0.2mg/L ＋蔗糖3 % ＋瓊脂0.6 % ，繼代培養(yǎng)25d 增殖系數(shù)可達(dá)7.5 ，且生長(zhǎng)健壯。
在1/2MS + IBAO.3mg/L十蔗糖0.15％十瓊脂0.6 ％的培養(yǎng)基上，夜香樹(shù)生根效果較好，生根率達(dá)到100%，平均根數(shù)為5.7 。在夜香樹(shù)移栽煉苗的過(guò)程中要嚴(yán)格控制空氣相對(duì)濕度，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)夜香樹(shù)瓶苗極易失水皺縮，煉苗前10d 空氣相對(duì)濕度都應(yīng)該保持在80 ％以上，最好是通過(guò)扣玻璃瓶或塑料薄膜來(lái)保持濕度。
夜香樹(shù)的花香過(guò)于濃郁，近距離聞其香氣易使人引起頭暈或不舒服的感覺(jué)。故只可在公園或庭院的空曠處種植，且數(shù)量不宜過(guò)多過(guò)密。

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5 討論
在試管苗生根培養(yǎng)中，耗費(fèi)了大量的時(shí)間和培養(yǎng)空間，而采用試管苗瓶外生根不僅可以減少一次無(wú)菌操作的步驟，提高了培養(yǎng)空間，又簡(jiǎn)化了組織培養(yǎng)程序，降低了生產(chǎn)成本，提高了繁殖系數(shù)，能進(jìn)一步解決工廠化育苗的難題。因此是一項(xiàng)值得研究的技術(shù)之一。

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