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植物組織培養基的配制

來源：作者：發布時間：2013-07-27 11:28

母液的配制和保存

    基本培養基母液

    在植物組織培養過程中，配制培養基是日常必備的工作。為減少工作量，經常使用的培養基，可先將各種藥品配成濃縮一定倍數的母液，放入冰箱內保存，用時再按比例稀釋，這樣比較方便，且精確度高。母液要根據藥劑的化學性質分別配制，一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物質等母液。

    在配制大量元素母液時，要防止在混合各種鹽類時產生沉淀，為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合。在混合時要注意加入的先后次序，把Ca2+、Mn2+、Ba2+、SO42-、PO43-錯開，以免KH2PO4和MgSO4與CaCl2等發生化學反應，相互結合生成CaSO4、BaSO4、Ca3(PO4)2沉淀。另外在混合各種無機鹽時，其稀釋度要大，慢慢混合，同時邊混合邊攪拌。在配制微量元素母液時也要注意藥品的添加順序，以免產生沉淀。

    鐵鹽容易發生沉淀，需要單獨配制。一般用FeSO4·7H2O和Na2-EDTA配成鐵鹽螯合劑比較穩定，不易沉淀，鐵鹽放在棕色瓶中保存比較穩定。

    母液要用蒸餾水配制，藥品應選用純度較高的化學純CP或分析純AR，以免有雜質對培養物造成不利影響。藥品的稱量及定容都要準確，在稱量時不同的化學藥品需使用不同的藥勺，避免藥品的交叉污染和混雜，每稱好一種藥劑應立即作一記號，以免重復或遺漏。各種藥品先以少量水讓其充分溶解，然后依次混合。

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    配制好的母液應分別貼上標簽，注明母液種類、倍數、配制時間，并在記錄本上詳細記載配制及稱取量，以便工作的準確及日后檢查。母液最好在2-4℃的冰箱中保存，特別是有機物質要求更嚴，儲存時間不宜過長，如發現母液有霉菌污染或沉淀變質時，應重新配制。

    多數植物生長調節劑不溶于水或難溶于水，IAA、NAA、IBA、2，4-D等生長素類和GA3，可先用少量0.1molNaOH或95%酒精溶解，然后再用蒸餾水定容到所需要的體積。KT、6-BA等細胞分裂素類則可用少量1mol/LHCl加熱溶解，然后加水定容。植物生長調節劑母液可以在2-4℃的冰箱中保存。配制好的植物生長調節劑母液，也應在瓶上貼上標簽，注明名稱、濃度、配制日期，以便配制培養基基時計算，準確量取。

    培養基配制

    將配制好的各種母液按順序排列，并逐一檢查是否有沉淀或變色，避免使用已失效的母液。先取適量的蒸餾水防入容器內，然后依次用移液管按培養基配方要求量吸取預先配制好的各種母液及生長調節劑等，并混合在一起。再將瓊脂粉和糖加入其中，溶解混勻后加蒸餾水定容至所需體積。用0.1mol/LNaOH或HCl將培養基的pH調至所需的數值，然后分裝到培養容器中。根據材料的不同，裝入培養基的量稍有差別，一般培養裝入0.7~1.2cm厚，讓培養材料能保持原有的狀態即可。最后包扎好瓶口或蓋上瓶蓋，對不同配方的培養基要做好標記，以免混淆。

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培養基的pH是影響植物組織培養成功的因素之一。不同種類的植物，其生長發育適宜的pH值也不同，應該根據所培養的植物特性來確定pH值，多數植物要求滅菌前培養基的pH值調節到5.7~5.8。經高溫高壓滅菌后，培養基的pH值會下降0.2~0.8個的安慰，故滅菌前的pH要高于目標pH值0.5個單位。

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