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月季組織培養技術

來源：作者：發布時間：2013-07-23 17:16

    一、培養意義

    月季屬薔薇科薔薇屬多年生草本植物，每年多次開花，而且香味怡人，在觀賞植物中地位很高。另一大優點是分布極廣，適應性強，栽培容易。使得月季無愧于“花中皇后”之美譽，古今中外文人墨客詠嘆月季的佳作，不勝枚舉。多倫縣就是一個月季之鄉，但品種比較單一，更新換代緩慢。隨著組織培養技術的應用，多倫縣農業技術推廣中心于2000年11月引進組織培養全套設備，成功培育了大量優質月季組培苗，填補了市場空白，對加速新老品種更新換代，迅速普及名優新品種起到了重要作用。

    二、培養程序

    （一）無菌培養的建立

    （1）選條

    從中國科學院、中國農科院等一級科研機構引進6個月季優良品種，分別是“紅雙喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金絲鳥”。選取生長健壯的當年生枝條，用飽滿而未萌發的側芽作為外植體。以枝條中段芽最好，因為接種后，中段芽第5天左右就能萌發，而基部和梢部的芽往往遲至15天才萌發。

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    （2）培養基的配制

    整個培養過程都可用MS培養基，誘導芽萌發所加的植物激素只需要BA一種即可，每升用0.3～1.Omg，6個品種均適用，只是萌發遲早有些差別。

    （3）清洗外植體

    采回的枝條切去葉，再剝去附在莖上的葉柄及皮刺，先整段用洗手刷沾濃洗衣粉水仔細刷洗，再用自來水沖洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一個側芽，裝入消毒過的培養皿，放在超凈工作臺上，打開紫外燈，做表面滅菌30分鐘。

    （4）消毒與接種

    在超凈工作臺上，用飽和漂白粉上清液作表面滅菌25～30分鐘，滅菌時間快到時，即傾去滅菌溶液，用無菌水涮洗數次，無菌紗布吸干莖段外表水分，按無菌操作要求，接種到小試管里，從芽萌發到芽長到1厘米左右需要2～3周。

    （5）培養

    培養溫度21℃最好，最高不超過25℃，有晝夜溫差，光照10～12小時/天，光強800～1200LX。

    （二）繼代增殖

    （1）將上述無菌芽從原莖段上切下，轉接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培養基上，促使嫩莖長出更多的側芽，原莖段棄去。繼代增殖培養基每升用蔗糖30克。中國苗木網,www.cqhuayin.com

    （2）5周后，“紅雙喜”增殖了3.5倍，“白雪山”4.1倍，“和平”、“彩云”5～6倍，“皇冠”、“金絲鳥”達15倍。

    （3）每5～6周做一次繼代增殖，繼代前先制備好培養基，然后在無菌操作條件下，將月季嫩莖切成1～2節一段，投入新鮮的增殖培養基上，月季小苗就會按幾何級數增殖起來，也可以將大苗轉入到生根培養基上。

    （4）壯苗培養

    ①對增殖倍率高的品種，所增殖的嫩莖很細弱，要求進行一次壯苗培養，以取得適合生根和今后移栽的苗子。壯苗培養的培養基為：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特別強調繁殖速度，也可以一直使用這種培養基，以壯苗為主，增殖為輔，使增殖與壯苗合為一步。②培養條件。光照10～12小時/天，光強800～1800LX，溫度20～23℃，最高24～26℃。

    （5）生根與移栽

    月季嫩芽生長到一定長度時，就應切割下來，轉入生根培養基。切下的嫩芽長度以2～3厘米為宜，讓幼苗基部傷口愈合，已長出根原基，幼根尚未長出，即出瓶種植。這種方法不會損傷根系，移栽速度快，成活率高。
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    （a）以MS培養基為基礎，配方為MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上無根嫩莖，經2周左右出現根原基，幼根尚未長出即出瓶種植。

    （b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的瓊脂培養基，再種植到粗沙+園田土（1：3）介質中，總的原則是疏松透氣，有一定的保水、保肥能力。種植密度2～3厘米×4～6厘米/株，移栽完畢澆透水，并用0.1％的百菌清、多菌靈或甲基托布津等噴霧保苗，能顯著提高成活率。

    （c）移栽后管理。移栽后需保持相對濕度85％以上，在溫室、拱棚中移栽，覆好遮蔭網，一般成活率都比較高，并注意通風和溫度管理。4～6周后，須做好第二次移植，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中，每杯種1苗，再經4～6周，地上、地下部分都充分生長，有些植株還能開花，此時即可出售，或上盆種植，利于觀賞。

    （d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，視苗大小，濃度逐漸由0.1％提高到0.3％左右，施用種類有復合肥、尿素、磷酸二氫鉀，MS培養液等，通常每7～10天噴一次殺菌劑，如百菌清等保苗，也可結合噴藥施肥，以減少管理用工。試管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，須注意除草、施肥、防治病蟲害，及時掐去頂芽，尤其是花蕾，以促進側芽的生長，促使早日壯大。中國苗木網,999miaomu.com

    三、影響月季增殖的因素

    1.BA用量及側芽在莖段上的位置對側芽發育的影響。用“和平”品種月季的枝條，均等分為6段，取每段的一個側芽培養在無激素的MS基本培養基上，23天后可見接近枝條最頂端和緊挨著枝條基部的芽發育最慢，而枝條中部的芽發育比較快。

    在不同濃度BA的MS培養基上，BA含量為0.03～0.3毫克/升的培養基，促進“皇冠”“彩云”側芽的發育，如果BA超過O.3mg/L，則延遲芽的發育，但對于莖段中部的芽影響較小。

    2.摘心對莖增殖的影響。在繼代培養的接種操作時，切去嫩芽的頂芽后，再轉接到新的培養基上，對嫩芽增殖有很大的促進作用。

    3.赤霉素的影響。試用了赤霉素，其濃度為0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升，試驗發現所有濃度都抑制莖增殖，隨著其濃度增高，莖增殖數下降，赤霉素濃度增加，還出現細長的嫩莖和發育不全的葉子，畸型植株等。

    4.嫩芽長度對形成多芽苗的影響。莖尖在1～10毫米長短時，對形成多芽苗最有效，不但百分率高，而且每個莖段的側枝數也比較多，切割過短或過長都對莖的增殖不利，芽苗形成較少。切割過長會表現出葉子衰老等不利的現象，最適宜的莖尖長度為6～10毫米。中國苗木網,www.cqhuayin.com

    5.每次繼代培養所需時間對嫩莖增殖的影響。在MS+BA3+IAA0.3的培養基上，“紅雙喜”月季的培養時間為28天，繼代一次較好，超過28天，莖的數目已不再增加。

    6.MS配方和無機鹽濃度。試驗證明，全量的MS無機鹽對莖增殖效果最好。

    四、影響月季生根和移栽成活率的因素

    1.不同生長素種類和濃度對月季生根和移栽成活率的影響。以“彩云”為材料，用NAA、IAA兩種不同濃度的生長素做生根試驗，發現用NAA誘導生根和提高移栽成活率效果最好，濃度為100ppm為宜，發現以IAA誘導生根和提高移栽成活率效果并不理想，其濃度只能在1mg/L以下，超過時對生根的促進作用已不顯著，反而大幅度降低移栽成活率。

    2.無機鹽濃度和含糖量對月季生根的影響。采用較低濃度的無機鹽對月季生根效果較好。但糖濃度不可降低。否則削弱苗的生長勢。試驗證明1/2MS+30克/升蔗糖利于生根。

    3.瓊脂用量及對生根的影響。瓊脂粉用量在4～5克/升的范圍內對生根效果影響沒有顯著差別，以4克/升稍優，用最小不利于凝固，用量大培養過硬不利于扎根。 999苗木網,www.cqhuayin.com

    五、結論

    用組織培養的方法生產月季試管苗不僅生產周期短，而且繁殖倍數高，周年均可生產，年可生產月季試管苗50萬株，經濟效益，社會效益都很可觀，建議業界同仁能夠關注此項事業。（多倫縣農業技術推廣中心）

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