外植體的消毒 植物組織培養(yǎng)用的外植體大部分取自田間,表面上附著大量的微生物,這是組織培養(yǎng)的一大障礙。因此在材料接種培養(yǎng)前必須要消毒處理,消毒一方面要求把材料表面上的各種微生物殺滅,同時(shí)又不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影響其生長(zhǎng)。因此,外植體的消毒處理是植物組織培養(yǎng)工作中的重要一環(huán)。 (1)常用的消毒劑 常用的消毒劑如下表所示。理想的消毒劑應(yīng)具有消毒效果好,易被無(wú)菌水沖洗掉或能自行分解,對(duì)材料損傷小,對(duì)人體及其他生物無(wú)害,來(lái)源廣泛,價(jià)格低廉。 常用消毒劑的使用方法及效果 、倬凭 酒精是最常用的表面消毒劑,以70%~75%酒精殺菌效果最好,95%或無(wú)水酒精會(huì)使菌體表面蛋白質(zhì)快速脫水凝固,形成一層干燥膜,阻止了酒精的繼續(xù)滲入,殺菌效果大大降低。 酒精具有較強(qiáng)的穿透力,使菌體蛋白質(zhì)變性,殺菌效果好。同時(shí)它還具有較強(qiáng)的濕潤(rùn)作用,可排除材料上的空氣,利于其他消毒劑的滲入。但酒精對(duì)植物材料的殺傷作用也很大,浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng),植物材料的生長(zhǎng)將會(huì)受到影響,甚至被酒精殺死,使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間。但酒精不能徹底消毒,一般不單獨(dú)使用,多與其他消毒劑配合使用。 ②升汞 又稱氯化汞,Hg2+可以與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合,使蛋白質(zhì)變性,從而殺死菌體。升汞的消毒效果極佳,但易在植物材料上殘留,消毒后需用無(wú)菌水反復(fù)多次沖洗。升汞對(duì)環(huán)境危害大,對(duì)人畜的毒性極強(qiáng),使用后應(yīng)做好回收工作。 999苗木網(wǎng),999miaomu.com 、鄞温人徕c 次氯酸鈉是一種較好的消毒劑,它可以釋放出活性氯離子,從而殺死菌體。其消毒能力很強(qiáng),不易殘留,對(duì)環(huán)境無(wú)害。但次氯酸鈉溶液堿性很強(qiáng),對(duì)植物材料也有一定的破壞作用。 、芷追 漂白粉的有效成分是次氯酸鈣[Ca(ClO)2],消毒效果很好,對(duì)環(huán)境無(wú)害。它易吸潮散失有效氯而失效,故要密封保藏。 ⑤過(guò)氧化氫 也稱雙氧水,消毒效果好,易清除,又不會(huì)損傷外植體,常用于葉片的消毒。 、扌聺崰枩 這是一種廣普表面活性消毒劑,對(duì)絕大多數(shù)植物外植體傷害很小,殺菌效果好。 。2)消毒方法 、偾o尖、莖段及葉片等的消毒 消毒前先對(duì)植物組織進(jìn)行修整,去掉不需要的部分,然后用自來(lái)水沖洗。對(duì)于一些表面不光滑或長(zhǎng)有絨毛的材料,可用洗滌劑清洗,必要時(shí)用毛刷充分刷洗,硬質(zhì)材料可用刀刮。 消毒時(shí)在超凈臺(tái)上操作,先用70%酒精浸泡10~30s,以無(wú)菌水沖洗2~3次,然后按材料的老、嫩和枝條的堅(jiān)實(shí)程度,分別采用2%次氯酸鈉浸泡10~15min或用0.1%升汞浸5~10min。消毒時(shí)要不斷攪動(dòng),使植物材料與消毒劑充分地接觸。若材料有絨毛,最好在消毒液中加入幾滴Tween-20,最后用無(wú)菌水沖洗3~5次。 、诠麑(shí)及種子的消毒 999中國(guó)苗木網(wǎng),999miaomu.com 先用自來(lái)水沖洗10~20min,再用酒精迅速漂洗一下。果實(shí)用2%次氯酸鈉浸10min,后用無(wú)菌水沖洗2~3次。種子則先用10%次氯酸鈉浸泡20~30min,難以消毒的可用0.1%升汞消毒5~10min。對(duì)于種皮太硬的種子,也可預(yù)先去掉種皮,再用4%次氯酸鈉浸泡8~10min。 ③花藥的消毒 用于組織培養(yǎng)的花卉花藥多未成熟,其外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù),處于無(wú)菌狀態(tài)。消毒時(shí)將整個(gè)花蕾或幼穗用70%酒精浸泡數(shù)秒鐘,然后用無(wú)菌水沖洗2~3次,再在漂白粉中浸泡10min,最后用無(wú)菌水沖洗2~3次。 、芨暗紫虏科鞴俚南 由于這類材料生長(zhǎng)于土壤中,表面帶菌量大,消毒較為困難。可先用自來(lái)水沖洗,軟毛刷刷洗,用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位,再用酒精漂洗后,置于0.1%升汞中浸5~10min或2%次氯酸鈉中浸10~15min,最后用無(wú)菌水沖洗3次。 在操作時(shí)要根據(jù)材料的大小、幼嫩、質(zhì)地等差異做出判斷后,再選擇適宜的消毒劑種類、濃度和消毒時(shí)間,切不可生搬硬套。消毒的最佳效果應(yīng)以最大限度地殺死材料上的微生物,而又對(duì)材料的損傷最小為好。 苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
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