常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類,即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過(guò)濾、清洗和大量無(wú)菌水沖洗等措施；化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過(guò)氧化氫、高錳酸鉀、來(lái)蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理.這些方法和藥劑要根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當(dāng)選用.
　　培養(yǎng)基在制備后的24小時(shí)內(nèi)完成滅菌工序.高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi),其中的蒸汽不能外溢,壓力不斷上升,使水的沸點(diǎn)不斷提高,從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加.在0.1MPa的壓力下,鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃.在此蒸汽溫度下,可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢.
　　注意完全排除鍋內(nèi)空氣,使鍋內(nèi)全部是水蒸氣,滅菌才能徹底.高壓滅菌放氣有幾種不同的做法,但目的都是要排凈空氣,使鍋內(nèi)均勻升溫,保證滅菌徹底.常用方法是：關(guān)閉放氣閥,通電后,待壓力上升到0.05MPa時(shí),打開放氣閥,放出空氣,待壓力表指針歸零后,再關(guān)閉放氣閥.
　　關(guān)閥再通電后,壓力表上升達(dá)到0.1MPa時(shí),開始計(jì)時(shí),維持壓力0.1-0.15MPa,20分鐘.
　　到達(dá)保壓時(shí)間后,即可切斷電源,在壓力到0.5MPa,可緩慢放出蒸汽,應(yīng)注意不要使壓力降低太快,以致引起激烈的減壓沸騰,使容器中的液體四溢.當(dāng)壓力降到零后,才能開蓋,取出培養(yǎng)基,擺在平臺(tái)上,以待冷凝.不可久不放氣,引起培養(yǎng)基成分變化,以至培養(yǎng)基無(wú)法擺斜面.一旦放置過(guò)久,由于鍋爐內(nèi)有負(fù)壓,蓋子打不開,只要將放氣閥打開,大氣壓入,內(nèi)外壓力平衡,蓋子便易打開了. 中國(guó)苗木網(wǎng),999miaomu.com
　　對(duì)高壓滅菌后不變質(zhì)的物品,如無(wú)菌水、栽培介質(zhì)、接種工具,可以延長(zhǎng)滅菌時(shí)間或提高壓力.而培養(yǎng)基要嚴(yán)格遵守保壓時(shí)間,既要保壓徹底,又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低,不能隨意延長(zhǎng)時(shí)間.
　　對(duì)于一些布制品,如實(shí)驗(yàn)衣、口罩等也可用高壓滅菌.洗凈晾干后用耐高壓塑料袋裝好,高壓滅菌20-30分鐘.
　　高壓滅菌前后的培養(yǎng)基,其PH值下降0.2-0.3單位.高壓后培養(yǎng)基PH值的變化方向和幅度取決于多種因素.在高壓滅菌前用堿調(diào)高PH值至預(yù)定值的則相反.培養(yǎng)基中成分單一時(shí)和培養(yǎng)基中含有高或較高濃度物質(zhì)時(shí),高壓滅菌后的PH值變化幅度較大,甚至可大于2個(gè)PH值單位.環(huán)境PH值的變化大于0.5單位就有可能產(chǎn)生明顯的生理影響.
　　高壓滅菌通常會(huì)使培養(yǎng)基中的蔗糖水解為單糖,從而改變培養(yǎng)基的滲透壓.在8%-20%蔗糖范圍內(nèi),高壓滅菌后的培養(yǎng)基約升高0.43倍.
　　培養(yǎng)基中的鐵在高壓滅菌時(shí)會(huì)催化蔗糖水解,可使15%-25%的蔗糖水解為葡萄糖和果糖.培養(yǎng)基值小于5.5,其水解量更多,培養(yǎng)基中添加0.1%活性炭時(shí),高壓下蔗糖水解大大增強(qiáng),添加1%活性炭,蔗糖水解率可達(dá)5%.
　　一、為防止高壓滅菌產(chǎn)生的上訴一些變化可用下列方法：
　　1、經(jīng)常注意搜集有關(guān)高壓滅菌影響培養(yǎng)基成分的資料,以便及時(shí)采取有效措施.
　　2、設(shè)計(jì)培養(yǎng)基配方時(shí)盡量采用效果類似的穩(wěn)定試劑并準(zhǔn)確掌握劑量.如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇,以IBA代替IAA,控制活性炭的用量（在0.1%以下）注意PH值對(duì)高壓滅菌下培養(yǎng)基中成分的影響等. 999苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
　　3、配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意成分的適當(dāng)分組與加入的順序.如將磷、鈣和鐵放在最后加入.
　　4、注意高壓滅菌后培養(yǎng)基PH值的變化及回復(fù)動(dòng)態(tài).如高壓滅菌后的PH值常由5.8升高至6.48.而96小時(shí)后又回降至5.8左右.這樣在實(shí)驗(yàn)中就可以根據(jù)這一規(guī)律加以掌握.
　　二、用于無(wú)菌操作的器械采用灼燒滅菌
　　在無(wú)菌操作時(shí),把鑷子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中,使用之前取出在酒精燈火焰上灼燒滅菌.冷卻后,立即使用.操作中可采用250或500毫升的廣口瓶,放入95%的酒精,以便插入工具.
　　三、玻璃器皿及耐熱用具采用干熱滅菌
　　干熱滅菌是利用烘箱加熱到160-180℃的溫度來(lái)殺死微生物.由于在干熱條件下,細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的抗熱性大為提高,接近芽孢的抗熱水平,通常采用170℃持續(xù)90分鐘來(lái)滅菌.干熱滅菌的物品要預(yù)先洗凈并干燥,工具等要妥為包扎,以免滅菌后取用時(shí)重新污染.包扎可用耐高溫的塑料.滅菌時(shí)應(yīng)漸進(jìn)升溫,達(dá)到預(yù)定溫度后記錄時(shí)間.烘箱內(nèi)放置的物品的數(shù)量不宜過(guò)多,以免防礙熱對(duì)流和穿透,到指定時(shí)間斷電后,待充分冷涼,才能打開烘箱,以免因驟冷而使器皿破裂.干熱滅菌能源消耗太大,浪費(fèi)時(shí)間.
　　四、不耐熱的物質(zhì)采用過(guò)濾滅菌
　　一些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,如赤霉素、玉米素、脫落酸和某些微生物是不耐熱的,不能用高壓滅菌處理,通常采用過(guò)濾滅菌方法.

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