藍(lán)莓組培技術(shù) |
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來(lái)源: 作者: 發(fā)布時(shí)間:2013-07-23 17:14 |
一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì) 苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com 3.外植體的選擇和滅菌:不同品種、不同器官之間的分化能力有差別,且組織培養(yǎng)是建立在無(wú)菌操作基礎(chǔ)之上的專(zhuān)門(mén)技術(shù),因此在進(jìn)行藍(lán)莓組織培養(yǎng)時(shí),必須選擇合適的外植體進(jìn)行滅菌操作,以確保組織培養(yǎng)工作的順利進(jìn)行。 4.環(huán)境因素:(1)光照:包括光強(qiáng)、光質(zhì)、光周期,(2)溫度,(3)濕度,(4)氣體。 五、藍(lán)莓培養(yǎng)基的主要成分 (一)、基本培養(yǎng)基的主要成分: 1.無(wú)機(jī)鹽:(1)大量元素:C.H.O.N.P.K.Ca.Mg.S.Cl。(2)微量元素:Fe.Cu.Mo.Zn.Mn.Co.B.Na。(3)水:培養(yǎng)基95%是水,應(yīng)使用蒸餾水、雙蒸水或使用去離子水,水應(yīng)放在塑料容器中。 2.有機(jī)化合物:(1)糖(碳源和能源),(2)維生素類(lèi):有維生素b1(鹽酸硫胺素)、維生素b6(鹽酸砒哆醇)、生物素、煙酸、葉酸等,(3)氨基酸類(lèi)(有機(jī)氮源)。 3.植物激素(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)): (1)生長(zhǎng)素:主要包括IAA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、IBA(吲哚丁酸);它們的主要作用是誘導(dǎo)愈傷組織的形成、胚狀體的產(chǎn)生以及試管苗的生根,更重要的是配合一定比例的細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)腋芽及不定芽的產(chǎn)生;作用的強(qiáng)弱順序?yàn)椋?,4-D>NAA>IBA>IAA。 (2)細(xì)胞分裂素:天然:6-BA(6-芐基酰嘌呤)、KT(激動(dòng)素,糠基酰嘌呤);人工:ZT(玉米素)、2-iP(2-異戊烯酰嘌呤);它們的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞的分裂和器官的分化、延緩組織的衰老、增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成、抑制頂端優(yōu)勢(shì)、促進(jìn)側(cè)芽的生長(zhǎng)及顯著改變其他的激素作用;作用的強(qiáng)弱順序?yàn)椋篢DZ,4PU>ZT>2-iP>6-BA>KT。 999苗木網(wǎng),999miaomu.com (3)赤霉素:GA3。 (4)乙烯及乙烯抑制劑。 4.天然提取物(如椰乳、酵母提取物、番茄汁、香蕉泥等),其作用是提供一些必要的微量營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素等。 5.瓊脂(是從海藻中提取的一種高分子碳水化合物),其主要作用是使培養(yǎng)基在常溫下凝固,同時(shí)不參與代謝。 6.活性炭:加入培養(yǎng)基中的目的主要是利用其吸附能力,減少一些有害物質(zhì)的影響,如可以防止酚類(lèi)物質(zhì)污染而引起組織褐化死亡。 組培產(chǎn)業(yè)網(wǎng)(http://www.51zupei.com/) (二)、藍(lán)莓培養(yǎng)基:上面提到這些物質(zhì)是組培過(guò)程經(jīng)常用到,具體到藍(lán)莓,一般用WPM培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基,激素多用KT、6-BA,天然提取物和活性炭一般不用。 六、藍(lán)莓外植體的選擇和滅菌 (一)、外植體的選擇:以春季初發(fā)的嫩梢最為合適,取材時(shí)間要在晴天下午取材,取材部位以靠近木本的下部?jī)?nèi)堂枝為好。 (二)、外植體的滅菌方法 1、常用滅菌藥劑的使用和效果: 消毒劑使用濃度/%清除難易消毒時(shí)間/min滅菌效果 次氯酸鈉2易5-30很好 次氯酸鈣9-10易5-30很好 漂白粉飽和溶液易5-30很好 升汞0.1-1較難2-10最好 酒精70-75易0.2-2好 過(guò)氧化氫10-12最易5-15好 999中國(guó)苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com 溴水1-2易2-10很好 硝酸銀1較難5-30好 抗菌素4-50mg/L中30-60較好 對(duì)于藍(lán)莓而言,一般先用75%酒精處理10-30苗,再用升汞處理5-10分鐘,根據(jù)材料的老嫩程度、外界環(huán)境不同而選擇適當(dāng)?shù)奶幚頃r(shí)間,一般是從低到高作實(shí)驗(yàn)摸索最佳的處理時(shí)間。 2.滅菌方法: (1)莖尖、莖段及葉片等的消毒:用清潔劑清洗、水流沖刷4小時(shí)左右---75%酒精浸泡10-30秒---無(wú)菌水洗1-2次---升汞溶液泡5-10min---無(wú)菌水洗7-10次 七、外植體接種和培養(yǎng) 1.外植體的接種 (1)接種室的消毒:用70%酒精噴霧使細(xì)菌和真菌孢子隨灰塵的沉降而沉降,再用紫外燈照射20min;并且每月用高錳酸鉀與甲醛蒸氣熏蒸一次。超凈工作臺(tái)可用新吉爾滅或酒精擦洗,其它一切器皿、衣物都要經(jīng)嚴(yán)格的滅菌才能帶進(jìn)接種室。 (2)接種:左手拿培養(yǎng)瓶,右手拿接種工具接種,瓶口要靠近酒精燈火焰、接種動(dòng)作要快,以免造成污染。 2.培養(yǎng)方法 (1)根據(jù)外植體不同可分為:胚胎培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)。藍(lán)莓常用的是器官培養(yǎng)或組織培養(yǎng)。 (2)根據(jù)培養(yǎng)方式不同可分為:固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、半固體培養(yǎng)、雙層培養(yǎng)。具體到藍(lán)莓,一般都是固體培養(yǎng),即用瓊脂作為支持物,在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)藍(lán)莓組培苗。 中國(guó)苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com 3.培養(yǎng)條件:指溫度、濕度、光照、PH值、氧和其它氣體等。藍(lán)莓一般在25度左右進(jìn)行光照培養(yǎng),光強(qiáng)一般為3000-5000Lux,培養(yǎng)間濕度不宜過(guò)高,要控制是60%以下。經(jīng)過(guò)三十多天的培養(yǎng),就可進(jìn)行分苗了。 八、組培苗生根和馴化 增值的藍(lán)莓苗達(dá)到所需的規(guī)模后,即可進(jìn)行生根處理了。藍(lán)莓一般采取瓶外生根技術(shù),即在溫室內(nèi)進(jìn)行扦插生根,此種方法可以大量節(jié)省組培室的投資規(guī)模和生產(chǎn)成本。 中國(guó)苗木網(wǎng),999miaomu.com
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