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藍莓組培技術

當前位置: 中國苗木網 > 栽培技術 >
來源: 作者: 發布時間:2013-07-23 17:14

  一、實驗室設計
  1.洗滌室:器具的洗滌、干燥
  2.配置室:進行藥品的保存、配置、消毒、分裝等。
  3.滅菌室:對培養進行高溫高壓滅菌,有時候也會把培養基的熬制、分裝放在此房間。
  4.接種室:進行材料的接種,內置超凈工作臺或接種箱。外設緩沖間-放置拖鞋、工作服、工作帽等。
  5.培養室:植物材料的無菌培養,室內主要有培養架和控制溫度及光照的設備。
  其他配套:大型組培室,包括工廠化組培車間還好專門配套倉庫、更衣室和辦公室等,有的還要配備細胞學觀察實驗室,進行培養材料的組織學、細胞學、觀察照相等。
  二、常用設備和器材
  1.高壓蒸氣滅菌鍋:用于培養基、蒸餾水和接種器械的滅菌消毒。
  2.超菌工作臺:用于培養物的無菌操作。(由鼓風機、濾板、操作臺、紫外燈和照明燈組成)
  3.接種工具:包括鑷子、剪刀、解剖刀、灑精燈、接種器械滅菌器等。
  4.培養設備:包括空調機、定時器、溫度控制器、增濕機或去濕機、培養架、光照培養箱等。
  5.配置設備:包括天平、酸度計、磁力攪拌器、蒸餾水器、烘箱或玻璃儀器烘干器、電爐、藥品柜、冰箱或冷柜、晾瓶架等。
  在這些儀器設備中,高壓滅菌鍋、超凈工作臺、電子天秤、培養架、冰箱、接種工具等是組培必備的,也是每天都要用到的,因此質量要可靠。 999苗木網,www.cqhuayin.com
  三、玻璃器皿的選擇和清洗
  1.玻璃器皿的選擇
  *試管-適合于用少量培養基及試驗各種不同配方時選用。
  *三角錐瓶-適用于各種培養(如固體培養、液體培養、大規模培養或一般培養)。
  *L形管和T形管-為專用的旋轉式液體培養試管。
  *培養皿-適于作單細胞的固體平板培養、胚和花藥培養和無菌發芽。
  *角形培養瓶和圓形培養瓶-適用于液體培養用,如單細胞和原生質體的淺層培養。
  *組培瓶/果醬瓶-常用作試管苗大量繁殖用的培養瓶。
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  2.玻璃器皿的清洗
  (1)清洗玻璃器皿用的洗滌劑有肥皂、洗潔精、洗衣粉、和鉻酸鉀洗滌液。
  (2)清洗時先將器皿中的殘渣除去,用清水洗凈,再用熱的肥皂水或洗潔精洗凈,清水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗一次,干后備用。
  (3)洗凈的玻璃器皿應透明發亮、內外壁水膜均勻,不掛水珠。
  四、影響藍莓組培的因素
  1.樹種因素:(1)基因型,(2)植株年齡,(3)組織和器官的年齡,(4)植株的生理狀態,(5)取材年份及生長條件,(6)取材部位及大小。
  2.培養基因素:無機鹽、有機化合物、植物激素、天然提取物、瓊脂、PH值、滲透壓、活性炭。藍莓組織培養的成功與否,除了培養材料本身的因素外,很大程度上取決于對培養基的選擇。培養基的種類、成份等直接影響培養材料的生長發育。故應根據培養材料的種類和部位,選取適宜的培養基。

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  3.外植體的選擇和滅菌:不同品種、不同器官之間的分化能力有差別,且組織培養是建立在無菌操作基礎之上的專門技術,因此在進行藍莓組織培養時,必須選擇合適的外植體進行滅菌操作,以確保組織培養工作的順利進行。
  4.環境因素:(1)光照:包括光強、光質、光周期,(2)溫度,(3)濕度,(4)氣體。
  五、藍莓培養基的主要成分
  (一)、基本培養基的主要成分:
  1.無機鹽:(1)大量元素:C.H.O.N.P.K.Ca.Mg.S.Cl。(2)微量元素:Fe.Cu.Mo.Zn.Mn.Co.B.Na。(3)水:培養基95%是水,應使用蒸餾水、雙蒸水或使用去離子水,水應放在塑料容器中。
  2.有機化合物:(1)糖(碳源和能源),(2)維生素類:有維生素b1(鹽酸硫胺素)、維生素b6(鹽酸砒哆醇)、生物素、煙酸、葉酸等,(3)氨基酸類(有機氮源)。
  3.植物激素(生長調節物質):
  (1)生長素:主要包括IAA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、IBA(吲哚丁酸);它們的主要作用是誘導愈傷組織的形成、胚狀體的產生以及試管苗的生根,更重要的是配合一定比例的細胞分裂素誘導腋芽及不定芽的產生;作用的強弱順序為:2,4-D>NAA>IBA>IAA。
  (2)細胞分裂素:天然:6-BA(6-芐基酰嘌呤)、KT(激動素,糠基酰嘌呤);人工:ZT(玉米素)、2-iP(2-異戊烯酰嘌呤);它們的主要作用是促進細胞的分裂和器官的分化、延緩組織的衰老、增強蛋白質的合成、抑制頂端優勢、促進側芽的生長及顯著改變其他的激素作用;作用的強弱順序為:TDZ,4PU>ZT>2-iP>6-BA>KT。

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  (3)赤霉素:GA3。
  (4)乙烯及乙烯抑制劑。
  4.天然提取物(如椰乳、酵母提取物、番茄汁、香蕉泥等),其作用是提供一些必要的微量營養成分、生理活性物質和生長激素等。
  5.瓊脂(是從海藻中提取的一種高分子碳水化合物),其主要作用是使培養基在常溫下凝固,同時不參與代謝。
  6.活性炭:加入培養基中的目的主要是利用其吸附能力,減少一些有害物質的影響,如可以防止酚類物質污染而引起組織褐化死亡。
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  (二)、藍莓培養基:上面提到這些物質是組培過程經常用到,具體到藍莓,一般用WPM培養基作為基本培養基,激素多用KT、6-BA,天然提取物和活性炭一般不用。
  六、藍莓外植體的選擇和滅菌
  (一)、外植體的選擇:以春季初發的嫩梢最為合適,取材時間要在晴天下午取材,取材部位以靠近木本的下部內堂枝為好。
  (二)、外植體的滅菌方法
  1、常用滅菌藥劑的使用和效果:
  消毒劑使用濃度/%清除難易消毒時間/min滅菌效果
  次氯酸鈉2易5-30很好
  次氯酸鈣9-10易5-30很好
  漂白粉飽和溶液易5-30很好
  升汞0.1-1較難2-10最好
  酒精70-75易0.2-2好
  過氧化氫10-12最易5-15好 999中國苗木網,www.cqhuayin.com
  溴水1-2易2-10很好
  硝酸銀1較難5-30好
  抗菌素4-50mg/L中30-60較好
  對于藍莓而言,一般先用75%酒精處理10-30苗,再用升汞處理5-10分鐘,根據材料的老嫩程度、外界環境不同而選擇適當的處理時間,一般是從低到高作實驗摸索最佳的處理時間。
  2.滅菌方法:
  (1)莖尖、莖段及葉片等的消毒:用清潔劑清洗、水流沖刷4小時左右---75%酒精浸泡10-30秒---無菌水洗1-2次---升汞溶液泡5-10min---無菌水洗7-10次
  七、外植體接種和培養
  1.外植體的接種
  (1)接種室的消毒:用70%酒精噴霧使細菌和真菌孢子隨灰塵的沉降而沉降,再用紫外燈照射20min;并且每月用高錳酸鉀與甲醛蒸氣熏蒸一次。超凈工作臺可用新吉爾滅或酒精擦洗,其它一切器皿、衣物都要經嚴格的滅菌才能帶進接種室。
  (2)接種:左手拿培養瓶,右手拿接種工具接種,瓶口要靠近酒精燈火焰、接種動作要快,以免造成污染。
  2.培養方法
  (1)根據外植體不同可分為:胚胎培養、器官培養、組織培養、細胞培養、原生質體培養。藍莓常用的是器官培養或組織培養。
  (2)根據培養方式不同可分為:固體培養、液體培養、半固體培養、雙層培養。具體到藍莓,一般都是固體培養,即用瓊脂作為支持物,在固體培養基上培養藍莓組培苗。

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  3.培養條件:指溫度、濕度、光照、PH值、氧和其它氣體等。藍莓一般在25度左右進行光照培養,光強一般為3000-5000Lux,培養間濕度不宜過高,要控制是60%以下。經過三十多天的培養,就可進行分苗了。
  八、組培苗生根和馴化
  增值的藍莓苗達到所需的規模后,即可進行生根處理了。藍莓一般采取瓶外生根技術,即在溫室內進行扦插生根,此種方法可以大量節省組培室的投資規模和生產成本。
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