999中國苗木網苗木供應信息：聯系時請說明是在（999苗木網）上看到的苗木信息

藍莓組培技術

來源：作者：發布時間：2013-07-23 17:14

　　一、實驗室設計
　　1.洗滌室：器具的洗滌、干燥
　　2.配置室：進行藥品的保存、配置、消毒、分裝等。
　　3.滅菌室：對培養進行高溫高壓滅菌，有時候也會把培養基的熬制、分裝放在此房間。
　　4.接種室：進行材料的接種，內置超凈工作臺或接種箱。外設緩沖間-放置拖鞋、工作服、工作帽等。
　　5.培養室：植物材料的無菌培養，室內主要有培養架和控制溫度及光照的設備。
　　其他配套：大型組培室，包括工廠化組培車間還好專門配套倉庫、更衣室和辦公室等，有的還要配備細胞學觀察實驗室，進行培養材料的組織學、細胞學、觀察照相等。
　　二、常用設備和器材
　　1.高壓蒸氣滅菌鍋：用于培養基、蒸餾水和接種器械的滅菌消毒。
　　2.超菌工作臺：用于培養物的無菌操作。（由鼓風機、濾板、操作臺、紫外燈和照明燈組成）
　　3.接種工具：包括鑷子、剪刀、解剖刀、灑精燈、接種器械滅菌器等。
　　4.培養設備：包括空調機、定時器、溫度控制器、增濕機或去濕機、培養架、光照培養箱等。
　　5.配置設備：包括天平、酸度計、磁力攪拌器、蒸餾水器、烘箱或玻璃儀器烘干器、電爐、藥品柜、冰箱或冷柜、晾瓶架等。
　　在這些儀器設備中，高壓滅菌鍋、超凈工作臺、電子天秤、培養架、冰箱、接種工具等是組培必備的，也是每天都要用到的，因此質量要可靠。 999苗木網,www.cqhuayin.com
　　三、玻璃器皿的選擇和清洗
　　1.玻璃器皿的選擇
　　*試管-適合于用少量培養基及試驗各種不同配方時選用。
　　*三角錐瓶-適用于各種培養（如固體培養、液體培養、大規模培養或一般培養）。
　　*L形管和T形管-為專用的旋轉式液體培養試管。
　　*培養皿-適于作單細胞的固體平板培養、胚和花藥培養和無菌發芽。
　　*角形培養瓶和圓形培養瓶-適用于液體培養用，如單細胞和原生質體的淺層培養。
　　*組培瓶/果醬瓶-常用作試管苗大量繁殖用的培養瓶。
　　組培產業網（http://www.51zupei.com/）
　　2.玻璃器皿的清洗
　　（1）清洗玻璃器皿用的洗滌劑有肥皂、洗潔精、洗衣粉、和鉻酸鉀洗滌液。
　　（2）清洗時先將器皿中的殘渣除去，用清水洗凈，再用熱的肥皂水或洗潔精洗凈，清水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗一次，干后備用。
　　（3）洗凈的玻璃器皿應透明發亮、內外壁水膜均勻，不掛水珠。
　　四、影響藍莓組培的因素
　　1.樹種因素：(1)基因型，(2)植株年齡，(3)組織和器官的年齡，(4)植株的生理狀態，(5)取材年份及生長條件，(6)取材部位及大小。
　　2.培養基因素：無機鹽、有機化合物、植物激素、天然提取物、瓊脂、PH值、滲透壓、活性炭。藍莓組織培養的成功與否，除了培養材料本身的因素外，很大程度上取決于對培養基的選擇。培養基的種類、成份等直接影響培養材料的生長發育。故應根據培養材料的種類和部位，選取適宜的培養基。

苗木網,www.cqhuayin.com

　　3.外植體的選擇和滅菌：不同品種、不同器官之間的分化能力有差別，且組織培養是建立在無菌操作基礎之上的專門技術，因此在進行藍莓組織培養時，必須選擇合適的外植體進行滅菌操作，以確保組織培養工作的順利進行。
　　4.環境因素：(1)光照：包括光強、光質、光周期，(2)溫度，(3)濕度，(4)氣體。
　　五、藍莓培養基的主要成分
　　（一）、基本培養基的主要成分：
　　1.無機鹽：(1)大量元素：C.H.O.N.P.K.Ca.Mg.S.Cl。(2)微量元素：Fe.Cu.Mo.Zn.Mn.Co.B.Na。(3)水：培養基95%是水，應使用蒸餾水、雙蒸水或使用去離子水,水應放在塑料容器中。
　　2.有機化合物：(1)糖(碳源和能源)，(2)維生素類：有維生素b1(鹽酸硫胺素)、維生素b6(鹽酸砒哆醇)、生物素、煙酸、葉酸等，(3)氨基酸類(有機氮源)。
　　3.植物激素（生長調節物質）：
　　（1）生長素：主要包括IAA（吲哚乙酸）、NAA（萘乙酸）、2,4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）、IBA（吲哚丁酸）；它們的主要作用是誘導愈傷組織的形成、胚狀體的產生以及試管苗的生根，更重要的是配合一定比例的細胞分裂素誘導腋芽及不定芽的產生；作用的強弱順序為：2，4-D>NAA>IBA>IAA。
　　（2）細胞分裂素：天然：6-BA（6－芐基酰嘌呤）、KT（激動素，糠基酰嘌呤）；人工：ZT（玉米素）、2-iP（2-異戊烯酰嘌呤）；它們的主要作用是促進細胞的分裂和器官的分化、延緩組織的衰老、增強蛋白質的合成、抑制頂端優勢、促進側芽的生長及顯著改變其他的激素作用；作用的強弱順序為：TDZ,4PU>ZT>2-iP>6-BA>KT。

999苗木網,999miaomu.com

　　（3）赤霉素：GA3。
　　（4）乙烯及乙烯抑制劑。
　　4.天然提取物（如椰乳、酵母提取物、番茄汁、香蕉泥等），其作用是提供一些必要的微量營養成分、生理活性物質和生長激素等。
　　5.瓊脂（是從海藻中提取的一種高分子碳水化合物），其主要作用是使培養基在常溫下凝固，同時不參與代謝。
　　6.活性炭：加入培養基中的目的主要是利用其吸附能力，減少一些有害物質的影響，如可以防止酚類物質污染而引起組織褐化死亡。
　　組培產業網（http://www.51zupei.com/）
　　(二)、藍莓培養基：上面提到這些物質是組培過程經常用到，具體到藍莓，一般用WPM培養基作為基本培養基，激素多用KT、6-BA，天然提取物和活性炭一般不用。
　　六、藍莓外植體的選擇和滅菌
　　（一）、外植體的選擇：以春季初發的嫩梢最為合適，取材時間要在晴天下午取材，取材部位以靠近木本的下部內堂枝為好。
　　(二)、外植體的滅菌方法
　　1、常用滅菌藥劑的使用和效果：
　　消毒劑使用濃度/%清除難易消毒時間/min滅菌效果
　　次氯酸鈉2易5-30很好
　　次氯酸鈣9-10易5-30很好
　　漂白粉飽和溶液易5-30很好
　　升汞0.1-1較難2-10最好
　　酒精70-75易0.2-2好
　　過氧化氫10-12最易5-15好 999中國苗木網,www.cqhuayin.com
　　溴水1-2易2-10很好
　　硝酸銀1較難5-30好
　　抗菌素4-50mg/L中30-60較好
　　對于藍莓而言，一般先用75%酒精處理10-30苗，再用升汞處理5-10分鐘，根據材料的老嫩程度、外界環境不同而選擇適當的處理時間，一般是從低到高作實驗摸索最佳的處理時間。
　　2.滅菌方法：
　　(1)莖尖、莖段及葉片等的消毒：用清潔劑清洗、水流沖刷4小時左右---75%酒精浸泡10-30秒---無菌水洗1-2次---升汞溶液泡5-10min---無菌水洗7-10次
　　七、外植體接種和培養
　　1.外植體的接種
　　（1）接種室的消毒：用70%酒精噴霧使細菌和真菌孢子隨灰塵的沉降而沉降,再用紫外燈照射20min；并且每月用高錳酸鉀與甲醛蒸氣熏蒸一次。超凈工作臺可用新吉爾滅或酒精擦洗，其它一切器皿、衣物都要經嚴格的滅菌才能帶進接種室。
　　（2）接種：左手拿培養瓶，右手拿接種工具接種，瓶口要靠近酒精燈火焰、接種動作要快，以免造成污染。
　　2.培養方法
　　（1）根據外植體不同可分為：胚胎培養、器官培養、組織培養、細胞培養、原生質體培養。藍莓常用的是器官培養或組織培養。
　　（2）根據培養方式不同可分為：固體培養、液體培養、半固體培養、雙層培養。具體到藍莓，一般都是固體培養，即用瓊脂作為支持物，在固體培養基上培養藍莓組培苗。

中國苗木網,www.cqhuayin.com

　　3.培養條件：指溫度、濕度、光照、PH值、氧和其它氣體等。藍莓一般在25度左右進行光照培養，光強一般為3000-5000Lux，培養間濕度不宜過高，要控制是60%以下。經過三十多天的培養，就可進行分苗了。
　　八、組培苗生根和馴化
　　增值的藍莓苗達到所需的規模后，即可進行生根處理了。藍莓一般采取瓶外生根技術，即在溫室內進行扦插生根，此種方法可以大量節省組培室的投資規模和生產成本。

中國苗木網,999miaomu.com