組織培養(yǎng)已成為當(dāng)前農(nóng)林種苗生產(chǎn)中的一種重要的繁殖手段,與常規(guī)的無性繁殖方法相比,它具有繁殖速度快、周年生產(chǎn)、產(chǎn)品一致性好等優(yōu)點,尤其在繁殖一些種源稀缺的品種時,更能體現(xiàn)它的優(yōu)勢。紅葉石楠是近年從國外引進(jìn)的一個國際新品種,組織培養(yǎng)可以分以下幾個步驟進(jìn)行:外植體的取得→初代培養(yǎng)(無菌系的建立)→繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng))→生根培養(yǎng)→煉苗及過渡移栽→移植到大田。
一、外植體的取得:
選擇紅葉石楠的莖尖和莖段作為組培用的外植體。在取得紅葉石楠母株后,先置于溫室內(nèi)培養(yǎng)2周左右,期間注意不灑葉面水,每隔3~5天噴施一次殺菌劑,可有效降低初代培養(yǎng)時的污染率。在實際操作中,選取嫩枝先端未木質(zhì)化和半木質(zhì)化部分,剪成長10cm左右的單芽,莖段部分去葉留2mm左右葉柄,莖尖部分可保留半張小葉,以飽和洗衣粉溶液浸泡3分鐘,用清水沖洗后備用。
二、初代培養(yǎng):
清洗后的外植體在接種前需進(jìn)行消毒處理,在超凈工作臺上用75%酒精浸泡10秒鐘,再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中滅菌8分鐘,倒去滅菌液,用事先準(zhǔn)備好的無菌水沖洗4~5次,瀝干水后,即可將帶腋芽的莖段或莖尖以生態(tài)學(xué)下端朝下,垂直接種到初代培養(yǎng)基上,以每瓶培養(yǎng)基接種一個外植體為宜。經(jīng)過多次試驗,初代培養(yǎng)基以1/2MS+蔗糖30g+瓊脂7g+2.0BA+0.2IBA為最佳,pH值5.5~5.8,培養(yǎng)室溫度控制在25℃~30℃之間,光照12小時。接種后一周左右腋芽開始萌動,30~40天可伸長到2cm左右,即可切下進(jìn)入下一階段的繼代(增殖)培養(yǎng)。 999中國苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
三、繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng)):
一般第一次繼代時增殖率較低,經(jīng)2~3次繼代后增殖數(shù)可達(dá)5倍左右。繼代培養(yǎng)基可用MS+1.0BA+0.1IBA,pH值5.5~5.8之間,每日光照12小時。無根的試管苗經(jīng)30~40天培養(yǎng)達(dá)到3cm左右時,即可切割以擴(kuò)大繁殖。當(dāng)繼代苗達(dá)到一定數(shù)量后,可以進(jìn)行生根培養(yǎng)。
四、生根培養(yǎng):
當(dāng)紅葉石楠無根苗長到高2cm左右時,可轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基可用1/2MS+0.2~0.3NAA,一般經(jīng)一周左右可見紅色根生成,30~40天后根長1~3cm,即可進(jìn)行煉苗反馴化,準(zhǔn)備移栽。 999中國苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com
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